Relatório- Teste Bioquímico- Microlokos

Introdução :           

                      

Os microrganismos apresentam especificidades e similaridades, as quais podemos identificar por meio de recursos diversos. As bactérias são classificadas em gram positivas e gram negativas, a partir da coloração de gram, por exemplo. O método desenvolvido pelo cientista Hans Christian Gram consiste em tornar as células das bactérias violáceas, para depois descolorir as mesmas com o solvente orgânico etanol-acetona. As células descoloridas, assumem um tom rosa e pertencem às bactérias gram negativas. Já as células que permanecem com a coloração roxa, são referentes às bactérias gram positivas. Amplos estudos foram desenvolvidos para determinar propriedades inerentes às classes supracitadas, com o objetivo de compreender as divergências observadas em experimentos práticos e desenvolver teorias que comportem uma explicação coerente com os resultados obtidos.

         A aula prática promoveu alguns testes bioquímicos. Os testes bioquímicos aplicados aos microrganismos estabelecem algumas das importantes características bacterianas.  A realização de testes em determinada colônia desconhecida, pode prover esclarecimentos que indicarão a espécie em questão. Dentre elas, o comportamento metabólico de determinada espécie, conferirá uma confirmação bioquímica da espécie em análise.

Os ensaios realizados avaliaram a motilidade, descarboxilação da descarboxilação da lisina, produção de gás,utilização de citrato como fonte de carbono e a fermentação por consumo de glicose,lactose e sorbitol.

           

Objetivo:

         Interpretação de resultados de transformação metabólicas ocorridas em algumas provas bioquímica empregadas para identificação de bactérias em diferentes ambientes, as características como: metabolismo, capacidade de degradar determinados substratos, produção de gases, mudança de cor.

Materiais:

Indicador de pH vermelho de metila

Reagente Voges-Proskauer (KOH 40%).

Reagente de Kovac

Agulha bacteriológica

Alça bacteriológica

Bico de Bunsen

Amostra da bactéria.

Tubo de ensaio contendo meio de cultura Ágar Lisina Ferro (LIA)

Tubo de ensaio contendo meio de cultura Ágar citrato de simmons

Tubo de ensaio contendo meio de cultura Ágar TSI – triplo açúcar ferro

Tubo de ensaio contendo meio de cultura Methyl Red-Vogel Proskauer (MRVP)

Tubo de ensaio contendo OF + Sorbitol (SB)

Tubo de ensaio contendo meio de cultura SIM

Tubo de ensaio contendo meio base para aminoácidos + arginina (ARG)

Tubo de ensaio contendo meio base para aminoácidos + ornitina (OR)

Tubo de ensaio contendo meio base para aminoácidos + lisina (LIS)

Tubo de ensaio contendo meio básico para aminoácidos

Tubos de ensaio contendo OF + Lactose (LAC)

Tubos de ensaio contendo OF + Glicose (GLI)

Procedimentos:

Primeiramente os tubos foram perfeitamente identificados, a bactéria foi incubada no OF( lactose, glicose, sorbitol ).

O meio com óleo, sem identificação, foi utilizado como controle. Nos meios sem óleo foram feitos 3 testes ao mesmo tempo (produção de sulfeto, indol e motilidade ), no meio indol foi adicionado reativo de kovacs depois do crescimento.

Os outros testes foram nos meios: LIA, TSI, Citrato, MRVP ( metil red, voges-proskauer ), no meio citrato se usou indicador de ph azul bromofenol e no MRVP, usou-se vermelho de metila e KOH + NAFTA após o crescimento.

Trabalhou-se atrás da chama, flambando os tubos 3 vezes antes e depois de abertos, e a agulha corretamente esterilizada.

Resultados:

SIM-

inoculado- Antes da incubação

SIM- Depois da incubação

Lactose c/ óleo -

inoculado- Antes da incubação

Lactose c/ óleo - depois da incubação

Lactose s/óleo-

inoculado- Antes da incubação

Lactose s/óleo - Depois da incubação

Sorbitol s/ óleo

inoculado- Antes da incubação

Sorbitol s/óleo-Depois da incubação 

Sorbitol c/óleo e Glicose

inoculado- Antes da incubação

Sorbitol- Depois da incubação

Glicose-depois

Base de aminoácido c/óleo

inoculado- Antes da incubação

Base de aminoácido - depois da incubação

TSI  inoculado antes da incubação

TSI depois da incubação

LIA-

inoculado- Antes da incubação

LIA-Depois da incubação

Citrato inoculado- Antes da incubação 

Citrato-Depois da incubação

Arginina-inoculado- Antes da incubação

Arginina - Depois da incubação

MRVP-

inoculado- Antes da incubação

Depois da incubação

Depois da incubação 

Ornitina-

inoculado- Antes da incubação

Depois da incubação

Lisina inoculado- Antes da incubação

Lisina- Depois da incubação

Discussão:

         O Tubo de OF contendo Glicose e o Tubo de OF contendo Glicose e Óleo não viraram, ou seja, não mudaram de cor. Isto indica que a bactéria inoculada não utiliza Glicose em nenhuma via metabólica, pois se utilizasse ocorreria mudança de cor, visto que a Glicose presente no meio seria consumida.

         O Tubo de OF contendo somente Sorbitol virou, isto é, apresentou mudança de coloração (passando de verde para azul). Este resultado mostra que a bactéria analisada possui capacidade de oxidar o Sorbitol, pois realiza degradação básica de proteína através dos aminoácidos.

         Porém, o Tubo de OF contendo Sorbitol e óleo não virou, ou seja, não mudou de cor. A partir do resultado deste tubo observa-se que a bactéria utiliza oxigênio para degradação, pois como o óleo impede o contato com o ar a bactéria não pôde usufruir do oxigênio. Logo, não possui capacidade de fermentar o Sorbitol.

         O Tubo de OF contendo Lactose e óleo, assim como o Tubo de OF contendendo somente Lactose, não apresentaram mudança de cor. Isto indica que a bactéria não utiliza lactose na via oxidativa nem na via fermentativa. 

         O Tubo SIM apresentou apenas uma coloração rosa, em forma de anel, na superfície da solução. Isto mostra que a bactéria não produziu Sulfeto, pois caso contrário teria apresentado coloração preta resultante da reação de Sulfeto com Ferro. Além disso, a bactéria produz Indol (a partir do Triptofano) e é imóvel, visto que só cresceu na região que entrou em contato com a agulha.

         O Tubo TSI apresentou ligeiro escurecimento de cor, deixando-o praticamente inalterado. Este resultado mostra a possibilidade da bactéria inoculada ser gram positiva, pois uma bactéria gram negativa mudaria drasticamente a cor.

         O Tubo de Citrato não mudou sua cor e permaneceu verde. Este resultado aponta que a bactéria analisada não utiliza o Citrato como única fonte de Carbono, ou seja, não possui a enzima Citrato Permease que absorve citrato.

         O Tubo LIA também não apresentou mudança de cor, ou seja, não virou o meio. Isto mostra que a bactéria não é capaz de fazer a descarbonilação da lisina e não possui ferro.

         Os Tubos de Arginina e Ornitina não viraram devido ao fato da bactéria não fermentar glicose, como observado anteriormente no Tubo de OF contendo Glicose. Dessa forma, não transformou Arginina em Ornitina e nem o contrário.

         Por outro lado, o Tubo de Lisina virou, ou seja, mudou de cor devido a fermentação da Glicose por parte da bactéria, pois a enzima descarboxilase transforma Lisina em Amina Primária.

         No Tubo MRVP 1 analisou-se os testes MR, onde a coloração observada foi vermelho significando positivo. Este resultado indica pH ácido (visto que o ponto de viragem do MR é em torno de 4,5), devido a produção de ácido oriundo da fermentação de glicose.

         No Tubo MRVP 2 analisou-se os testes VP, onde o resultado foi negativo, pois a bactéria inoculada não produz ceretoína através da Glicose.

         Com base na análise de todos os resultados e comparação com tabela concluiu-se que a bactéria inoculada foi a Micrococcus Luteus, que é gram positiva, pois os resultados encontrados são característicos de bactérias gram positiva.

Conclusão:

Ao termino dos experimentos, e 1 semana na estufa, podemos concluir que tivemos os resultados desejáveis, para descobrirmos qual bactérias estávamos trabalhando, utilizando as características apresentadas. A partir das características descobrimos que se trata de Micrococcus Luteus que é gram positiva.

Bibliografia:

     MADIGAN,M.T.;MARTINKO,J.M.;DUNLAP,PV;LARK,D.P. Microbiologia de Brock. 12. ed., Porto Alegre: Artemes, 2010. 1160p.