Prática de cultivo de bactérias

Prática de cultivo de bactérias

Características das bactérias:

Bacillus cereus

Bacillus cereus é uma bactéria gram-positiva, de forma cilíndrica, endêmica e que habita no solo. Algumas cepas são prejudiciais aos seres humanos e causam intoxicação alimentar, enquanto outras podem ser benéficas. As bactérias B. cereus são organismos aerobócos facultativos, e tal como outros membros do gênero Bacillus, podem produzir endósporo protetores. São responsáveis por doenças transmitidas através de alimentos mal cozidos, causando náuseas, diarreia e vômito. É importante lembrar que o cultivo dessas bactérias nos alimentos vai ser influenciado pela temperatura em que se encontra, sendo possível observar grupos da bactéria que conseguem sobreviver à condições de mal cozimento a menos de 100°C. A germinação da bactéria ocorre entre 10 a 50°C, sendo possível a conclusão de que uma refrigeração inadequada do alimento propicia a proliferação do patógeno.

Salmonella entérica

Duas bactérias compõem esse gênero, são: Salmonella bongori e Salmonella entérica. Ambas são de coloração gram-negativa. Por apresentarem um desempenho semelhante ao da bactéria Escherichia coli, esses organismos tem a atenção especial dos pesquisadores. São agentes causadores de doenças como: salmonelose e septicemia. Sua contaminação é devido à má manipulação de alimentos e defasagem na higiene do manipulador. A Salmonella entérica é a mais presente do cotidiano dos seres vivos por estar em alimentos como: ovos e frangos.

Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus é uma bactéria esférica, do grupo dos cocos gram-positivos, anaeróbia facultativa e dispostos em grupos ou “cachos de uva” encontrada na pele e nas fossas nasais de seres humanos. Pertencem à família Micrococcaceae. Sua nocividade é expressada por ser causadora de infeções que variam em grau, sendo o grande perigo atingir a corrente sanguínea podendo causar assepsia. A infecção por Staphylococcus aureus se dá, também, pelo contato com alimentos contaminados com as toxinas da bactéria.

Escherichia coli

A Escherichia coli é uma bactéria bacilar gram-negativa que habita a região intestinal do organismo de seres humanos e animais. São aeróbias e anaeróbias facultativas. Possuem flagelos em volta da célula e fímbrias que permitem sua fixação. É um dos poucos seres vivos com a capacidade de produzir todos os componentes de que são feitos a partir de compostos básicos. Muitas produzem exotoxina. São susceptíveis a ambientes secos, as quais não resistem, apesar de suas células conseguirem sobreviver por um longo período fora de um hospedeiro. A infecção com a bactéria pode causar gastroenterite, apesar de nem todos os tipos de E-coli serem nocivos à saúde. Os 4 tipos de E. coli nocivos, são: E. coli enterotoxigênica, enteroinvasiva, enteropatogênica e enterohemorrágica. A transmissão fecal-oral é a principal utilizada pela cepa patogênica, ocorrendo através de água ou alimentos contaminados, além do contato com fezes de alguém que esteja infectado. No entanto, a estirpe não nociva ao organismo compõe parte da flora intestinal humana, cerca de 0,1%) e podem ser benéficas aos hospedeiros por impedirem que bactérias patogênicas se estabeleçam. É uma bactéria cujo estudo sobre é abundante devido ao baixo custo para cultura.

Características dos meios e suas respectivas expectativas:

Ágar MYP

Descrição: Ágar MYP, ou Ágar Manitol-Gema de Ovo-Polimixina,  é o meio de cultura desenvolvido para isolamento e contagem da bactéria Bacillus cereus em alimento, pois, em relação aos demais, este é ajustado para as condições dessa bactéria (resistência à Polimixina B; ausência de fermentação de Manitol; presença de Lecitinase), possibilitando a sua demonstração quantitativa ou qualitativa.

Constituintes:

• fontes de nitrogênio, vitamina e carbono: extrato de carne bovina, peptona;
  
  
• fonte de carboidrato: D-manitol;
  
  
• detector da fermentação: indicador de pH Vermelho de Fenol.
  
  

Expectativa: é esperado o melhor avistamento das colônias de B. cereus, as quais deverão ser rugosas e secas, sua coloração será rosa, por não fermentar Manitol, e haverá um halo ao redor, uma zona de precipitado branco, consequente da Lecitina hidrolisada pela Lecitinase produzida por esta bactéria.

Ágar Cetrimida

Descrição: Esse meio de cultura é usado para o isolamento seletivo e contagem da bactéria Pseudomonas aeruginosa. A cetrimida é um composto amônio quaternário, o qual inibe uma grande variedade de outros organismos, incluindo outras espécies de Pseudomonas e organismos relacionados.

Constituintes:

• fonte de nitrogênio: peptona;
  
  
• fonte de carbono e de energia: glicerol;
  
  
• estimuladores da produção de piocianina: cloreto de magnésio e sulfato de potássio.
  
  

Expectativas: não haverá formação de colônias nesse meio de cultura devido à inibição da cetrimida.

Ágar EMB

Descrição:  é um meio para diferenciação ligeiramente seletivo utilizado para o isolamento e diferenciação de bacilos entéricos gram-negativos. Ele contém corantes de eosina Y e azul-de-metileno, os quais servem para inibir bactérias gram-positivas num determinado grau. Além disso, eles também atuam como indicadores de diferenciação em resposta à fermentação da lactose e/ou sacarose por microorganismos.

Constituintes:

• fonte de nitrogênio:  Digestão Enzimática de Gelatina;
  
  
• fonte de carboidrato: Lactose;
  
  
• tampão: Fosfato Dipotássico;
  
  
• indicadores: Eosina Y e o Azul de Metileno;
  
  
• agente seletivo: Azul de Metileno.
  
  

Expectativas: a área do meio em que foi depositado a E. coli deve apresentar colônias de grande dimensão cujo o centro possui a cor preta, além de um brilho verde metálico proveniente das ações dos corantes.

Ágar Manitol 7,5%

Descrição: esse meio é utilizado para o isolamento seletivo de estafilococos e para a detecção de Staphylococcus aureus. O cloreto de sódio a uma concentração de 7,5% inibe parcial, ou completamente, todos as bactérias que não são estafilococos. A fermentação com manitol, conforme indicada por uma alteração no indicador vermelho de fenol, ajuda na diferenciação das espécies de estafilococos. Aqueles que apresentam resultados positivos para a coagulase formam colônias amarelas com um halo de mesma coloração. Por outro lado, os que apresentam resultados negativos produzem colônias vermelhas pequenas, as quais não apresentam mudanças na coloração da região ao redor.

Constituintes:

• fontes de nitrogênio, vitaminas e carbono: Digestão Enzimática de Caseína, Digestão Enzimática de Tecido Animal e  Extrato de Carne Bovina;
  
  
• fonte de carboidrato: D-Manitol;
  
  
• inibidor das maioria das bactérias com exceção do Staphylococcus: Cloreto de Sódio;
  
  
• indicador de pH: Vermelho de Fenol;
  
  
• agente solidificante: agar.
  
  

Expectativas: a única região do meio em que aparecerá formação de colônias será a área em que foi adicionada a Staphylococcus aureus. Esta irá apresentar colônias amarelas com um halo de cor igual.

Ágar nutriente

Descrição: esse meio de cultura é recomendado para procedimentos de métodos padrões para a análise de alimentos, produtos lácteos, água e outros materiais. É frequentemente escolhido para realizar o crescimento de microrganismos não exigentes. Se necessário, pode ser modificado com a adição de enriquecimentos. Por exemplo, por meio da incorporação de 4-metillumbeliferil-β-DGlicuronídeo (MUG), o qual é usado quando se deseja detectar a  fluorogênica da bactéria Escherichia coli.

Constituintes:

• fontes de nitrogênio, carbono, vitaminas e aminoácidos: Digestão Enzimática de Gelatina e Extrato de Carne Bovina;
  
  
• agente solidificante: ágar.
  
  

Expectativas: formação de colônias em todas as quatro regiões do meio de cultura, pois deve-se haver o crescimento de todas as bactérias nele adicionadas.