Prática 13/09 - Grupo 2

Características das bactérias utilizadas:

1. Escherichia coli – A Escherichia coli pertencente à família Enterobacteriaceae, além de apresentar formato de bacilo, é gram-negativa, anaeróbia facultativa e fermentadora de açúcares. Ela é encontrada normalmente na microbiota entérica (intestino) de aves e mamíferos. Possui representantes comensais e alguns tipos patogênicos, destacando-se como as causadoras mais comuns de infecções urinárias, além de provocarem diarreia.
2. Staphylococcus aureus – Staphylococcus aureus é uma bactéria esférica, do grupo dos cocos gram-positivos, frequentemente encontrada na pele e nas fossas nasais de pessoas saudáveis. Entretanto pode provocar doenças, que vão desde uma simples infeção até infeções graves.
3. Bacillus cereus – O Bacillus cereus é uma bactéria beta hemolítica gram-positiva, de forma cilíndrica, endêmica, que vive no solo. Algumas cepas são prejudiciais aos seres humanos e causam intoxicação alimentar, enquanto outras cepas podem ser benéficas, como os probióticos para animais.
4. Salmonella enterica - São bactérias gram-negativas, em forma de bacilo, na sua maioria móveis (com flagelos peritríquios), não esporuladas, não capsuladas, sendo que a maioria não fermenta a lactose. As salmonelas são um gênero extremamente heterogêneo, composto por três espécies, Salmonella subterranea, Salmonella bongori e Salmonella enterica, esta última possuindo, atualmente, 2610 sorotipos. A classificação em serogrupos depende do antigênio O, enquanto a classificação em serotipos depende do antigênio H.

Características dos meios utilizados:

1. Meio de cultura Ágar MYP - Ágar MYP Base é utilizado com suplementos para a contagem seletiva e diferencial de Bacillus cereus em alimentos. Ágar MYP Base também é conhecido como Ágar Manitol-Gema de Ovo-Polimixina (Mannitol-Egg YolkPolymyxin Agar). desenvolveram o Ágar MYP para o isolamento de Bacillus cereus em alimentos. Este meio diferencia B. cereus de outras bactérias com base na resistência à Polimixina B, ausência de fermentação de Manitol e presença de Lecitinase. Aparência (Suplementado): O meio preparado é laranja amarelado a rosa alaranjado e opalescente a opaco.
2. Meio de cultura Ágar EMB - Baseia-se numa formulação descrita inicialmente por Holt-Harris e Teague em 1916. A formulação original de Holt-Harris e Teague foi modificada por Levine. A principal diferença entre as duas consiste na inclusão de sacarose no meio de Holt-Harris e Teague. A sacarose é fermentada por determinados organismos entéricos de forma mais rápida do que a lactose. O BD EMB Agar, Modified contém corantes de eosina Y e azul-de-metileno que inibe as bactérias gram-positivas num determinado grau. Os corantes funcionam também como indicadores de diferenciação em resposta à fermentação da lactose e/ou sacarose por microrganismos. Os coliformes produzem colônias pretas-azuladas, enquanto as colônias de Salmonella e Shigella são incolores ou têm uma cor âmbar transparente. As colônias de Escherichia coli poderão apresentar um reflexo verde metalizado característico, devido à rápida fermentação da lactose. O agar EMB (com ou sem sacarose) é incluído no conjunto de meios de isolamento de seletividade reduzida para a Salmonella de amostras fecais e de outro tipo. As bactérias gram-positivas como, por exemplo, estafilococos, leveduras e estreptococos fecais, poderão desenvolver-se neste meio e formar colônias puntiformes ou poderão ficar inibidas.
3. Meio de cultura Ágar Manitol 7,5 - O ágar manitol sal isola Staphylococcus através da inibição do crescimento da maioria das outras bactérias com uma alta concentração de sal. Contém 7,5% de Cloreto de Sódio adicionados ao Ágar Manitol Vermelho de Fenol. Cepas patogênicas de Staphylococcus (Staphylococcus coagulase-positivo) crescem exuberantemente e produzem colônias amarelas com halos amarelos. Os Staphylococcus não patogênicos produzem colônias vermelhas pequenas sem mudança na coloração do meio ao redor.Bactérias que crescem em alta concentração de sal e fermentam o manitol, produzem produtos ácidos, modificando o indicador de pH Vermelho de Fenol de vermelho para amarelo. Staphylococcus patogênicos típicos fermentam manitol e formam colônias amarelas com halos amarelos. Staphylococcus não patogênicos típicos não fermentam manitol e formam colônias vermelhas.
4. Meio de cultura Ágar Cetrimida - É um meio seletivo para o isolamento e contagem de Pseudomonas aeruginosa em amostras biológicas de origem animal e produtos farmacêuticos e cosméticos. A fórmula deste meio foi derivada do meio King A, favorecendo a produção de piocianina por Pseudomonas aeruginosa. Em 1951, Lowbury recomendou o uso do cetrimida em um meio seletivo para o isolamento de Pseudomonas. A concentração do inibidor foi reduzida por Lowbury e Collins(1955) como um resultado do aumento da pureza. A cetrimida (brometo de cetiltrimetilamônio) é um composto quaternário de amônio que inibe um grande número de bactérias incluindo espécies de Pseudomonas exceto Pseudomonas aeruginosa. A produção de piocianina (um pigmento azul, não-fluorescente, solúvel em água e clorofórmio) é estimulada pelo cloreto de magnésio e sulfato de potássio. O meio também favorece a produção de pigmentos fluorescente (pioverdinas) por algumas cepas de Pseudomonas aeruginosa. 
5. Meio Ágar Nutriente - Sua composição inclui extratos de carne e de leveduras, peptona e cloreto de sódio.Utilizado para microorganismos pouco exigentes nutricionalmente.
 

Expectativa de crescimento no meio:

1. Meio de cultura Ágar MYP - E. coli apresenta-se inibida; B. cereus é esperado colônias rosas e precipitado ao seu redor; S. aureus se espera crescimento de colônias amarelas.
2. Meio de cultura Ágar EMB - E. Coli demonstra morfologia de grande dimensão, pretas-azuladas, reflexo verde metalizado; S. enterica apresenta morfologia de grande dimensão, incolores a âmbar; S. Aureus e B. cereus serão inibidas ou formarão colônias em formatos de ponto.
3. Meio de cultura Ágar Manitol 7,5 - Somente crescimento do S. Aureus, com colônias amarelas.
4. Meio de cultura Ágar Cetrimida - Não terá crescimento.
5. Meio de cultura Ágar Nutriente - Haverá crescimento de E. Coli e S. Aureus.

Da esquerda para a direita, placas com Ágar: EMB, MYP, Manifol, Cetrimida e Nutriente.